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简要描述：ES打靶技术服务（Embryonic Stem Cell Targeting）是一种基于胚胎干细胞（ES细胞）的基因靶向技术，主要用于构建基因敲除或基因敲入动物模型。通过将外源DNA导入ES细胞，利用同源重组原理，将目标基因进行替换或插入，从而实现对基因组的精准修饰。
更新时间：2025-08-02 12:04:20
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ES打靶技术是一种基于胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ES）同源重组的基因编辑方法，通过将外源DNA定点整合至基因组特定位置，实现基因敲除（KO）、条件性敲除（CKO）、基因敲入（KI）及点突变（PM）等精准修饰。其核心原理包括：
同源重组机制：
设计包含同源臂（与靶基因同源）的载体，通过同源重组将外源序列（如筛选标记基因）插入目标位点。
正负筛选系统：
正筛选标记（如Neoᵣ）：插入同源区，筛选成功重组的ES细胞。
负筛选标记（如HSV-tk/DTA）：位于同源臂外侧，淘汰随机插入的细胞。
胚胎干细胞全能性：
修饰后的ES细胞注入囊胚，发育为嵌合体小鼠（F0），通过生殖系传递获得稳定遗传模型。
技术定位：ES打靶是CRISPR前时代的金标准，尤其适用于大片段编辑（>10 kb）和复杂基因修饰（如条件性敲除）。
关键步骤解析：
载体构建：
同源臂长度通常为3-5 kb，大片段插入需BAC载体。
ES细胞系选择：
常用品系：129S6/SvEvTac（高重组效率）、C57BL/6N（背景纯净）。
嵌合体制备：
囊胚注射后嵌合率约20-70%，需通过毛色标记（如白化宿主）直观筛选。
EPS细胞（Extended Pluripotent Stem Cells）由我国科学家于2017年shou次报道，其优势包括：
效率提升：
打靶效率达传统ES细胞的10-100倍。
周期缩短：
嵌合体一步获得，省去3个月种系传递。
全能性增强：
单细胞注入囊胚即可生成100%嵌合体。
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